全国临床检验操作规程(第4版)
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第十二节 血清视黄醇结合蛋白测定

视黄醇结合蛋白( retinol-binding protein,RBP)是至少由7种蛋白组成的家族,可由肝细胞、小肠及其他组织细胞合成,广泛分布于血浆及其他体液中。血浆中主要是由肝细胞表达分泌的RBP4,分子量仅21kD。其主要功能是与前白蛋白共同和维生素A的反式视黄醇形式结合、转运,并保护其不被氧化。RBP还参与胎儿的发育调控。血浆中RBP分子量小,可自由滤过肾小球,但原尿中99%的RBP被近曲小管上皮细胞以胞饮方式重摄取并分解(不以原型返回血浆),仅微量从尿排泄。血清RBP主要用各种定量免疫学方法检测,以免疫比浊法和酶联免疫吸附法多用,下面以免疫比浊法为例介绍。

【原理】

抗人RBP多或单克隆抗体与样本血清中RBP通过抗原-抗体反应特异性结合,形成免疫复合物微粒,导致浊度增加。在一定条件下,浊度的增加与免疫复合物微粒数即RBP数相关,得以定量样本中RBP浓度。浊度检测包括散射浊度法和透射浊度法2类(参阅本章第二节血清白蛋白测定中的免疫比浊法)。下面以RBP的透射浊度法测定为例介绍。

【试剂】

选用有正式批文的质量可靠产品。下面以RBP透射浊度法某试剂盒为例。该试剂盒包括:
试剂1: 40mmol/L磷酸盐缓冲液( pH 7.2~7.6),含83mmol/L聚乙二醇6000,10mmol/L EDTA-Na 2
试剂2: 40mmol/L磷酸盐缓冲液( pH 7.2~7.6),含羊抗人RBP抗血清6ml及10mmol/L EDTA-Na 2

【操作】

不同实验室具体反应条件会因所用仪器和试剂而异,在保证方法可靠的前提下,应按仪器和试剂说明书设定测定条件,进行定标品、质控样品和样品分析。

【结果计算】

血清/标准液的吸光度A = A 2-A 1。仪器根据系列稀释的RBP标准品浓度及对应的A,以多点定标方式建立的标准曲线或方程式,并以样本的A自动计算出样本中RBP浓度。

【参考区间】

成人血清RBP (透射浊度法) : 25~70mg/L (此参考区间引自试剂说明书)。

【注意事项】 1.方法学特点

本法对人RBP的最低检测限为0.5mg/L,线性范围0.5~126mg/L,批内、批间CV均≤3.5%。轻中度黄疸、溶血(血红蛋白10g/L)血清标本对本法无显著干扰。但脂浊血清有明显干扰,需超速离心获取清澈血清再测定。

2.影响因素

有关免疫比浊法的一些共同影响因素,参阅本章第二节血清白蛋白测定中免疫比浊法的注意事项。

3.参考区间应用

以其他定量免疫学方法,包括散射比浊法及透射免疫浊度法不同厂家试剂盒测定的结果均存在差异,应建立使用方法的本实验室参考区间。

【临床意义】 1.血清RBP升高

多见于各种原因所致肾小球滤过功能损伤,也见于过量摄入维生素A、营养过剩性脂肪肝等。在判断肾小球滤过功能损伤上,血清RBP与胱抑素C的诊断性能相当。由于血清胱抑素C的广泛应用,加之RBP的上述肾排泄特点,目前更常检测尿RBP浓度作为诊断近端肾小管损伤标志(参阅本章第二十三节尿视黄醇结合蛋白测定)。

2.血清RBP降低

维生素A缺乏症、低蛋白血症、肝病、甲状旁腺功能亢进、吸收不良综合征等,可出现血中RBP降低。