全国临床检验操作规程(第4版)
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第七节 血清铜蓝蛋白测定

铜蓝蛋白( ceruloplasmin,Cp)是肝细胞表达的含铜α 2-球蛋白,为分子量平均约132kD的单链糖肽,含糖约8%~9.5%。每分子Cp结合6~8个铜原子,因含铜呈蓝色而得名。除5%血浆铜游离存在外,95%存在于Cp中,故Cp被视为铜的无毒性转运载体和存储库。此外,Cp也是一种急性时相反应蛋白;并具有氧化酶样作用,可将Fe 2 +氧化为Fe 3 +结合到转铁蛋白上,也参与儿茶酚胺和多酚的氧化;还可抑制Cu 2 +等金属离子对膜脂质的过氧化损伤作用。血清Cp可用多种定量免疫学方法测定,下面以应用较多的免疫比浊法为例介绍。

【原理】

将抗人Cp多或单克隆抗体加入样本血清中,通过抗原-抗体反应与血清中Cp特异性结合,形成免疫复合物微粒,导致浊度增加。在一定的适宜条件下,浊度的增加与免疫复合物微粒数即Cp数相关,得以定量样本中Cp浓度。浊度改变的检测包括散射和透射浊度法2类(参阅本章第二节血清白蛋白测定中的免疫比浊法)。因后一种方法在自动生化分析仪上即可完成,被广泛使用。

【试剂】

选用有正式批文、量值可溯源至人血清蛋白参考物CRM 470的质量可靠产品。下面以Cp透射浊度法某试剂盒为例。

1.试剂1

50g/L聚乙二醇( PEG)的含防腐剂的磷酸盐缓冲液。

2.抗人Cp抗体工作液

含标定滴度的兔抗人铁蛋白抗体,以及稳定剂和防腐剂的磷酸盐缓冲剂。

3.样本稀释液

pH 7.0的50mmol/L磷酸盐缓冲液,含150mmol/L NaCl和防腐剂。

【操作】

不同实验室具体反应条件会因所用仪器和试剂而异,在保证方法可靠的前提下,应按仪器和试剂说明书设定测定条件,进行定标品、质控样品和样品分析。

【结果计算】

根据待测样本浊度,按系列浓度Cp标准品绘制的曲线及拟合的方程式,自动计算出样本中Cp浓度。

【参考区间】

成人血清Cp浓度(透射浊度法) :男性0.15~0.30g/L ( 1.10~2.20μmol/L),女性0.16~0.45g/L ( 1.17~3.30μmol/L)。2种单位间换算公式为g/L×7.333 =μmol/L。
以上参考区间引自试剂说明书。

【注意事项】 1.方法学特点

本法人血清Cp最低检测限为30mg/L ( 0.22μmol/L),线性范围为0.03~1.4g/L ( 0.22~10.44μmol/L),批内、批间CV均<2.0%。黄疸、溶血及类风湿因子<100IU/ml血清标本无显著干扰。但高甘油三酯血清标本对本法有负性干扰。

2.影响因素

有关透射浊度法的一些共同影响因素,参阅本章第二节血清白蛋白测定中免疫比浊法的注意事项。

3.参考区间应用

以其他定量免疫学方法,包括散射免疫浊度法及透射比浊法不同厂家试剂盒测定的结果均存在差异,应建立使用方法的本实验室参考区间。

【临床意义】 1. Cp减少

对Wilson病、营养性铜缺乏和Menkes病(遗传性铜吸收不良)有较大诊断价值。Wilson病是常染色体隐性遗传病,因血浆Cp显著减少(通常≤0.1g/L),血浆游离铜增加,铜沉积在肝可引起肝硬化,沉积在脑基底节的豆状核则导致豆状核变性,故该病又称为肝豆状核变性,纯合子携带者Cp显著降低,但杂合携带者Cp水平可仅轻度减少或正常。此外,营养不良、严重肝病及肾病综合征等所致Cp合成减少或大量丢失也可致Cp减少。

2. Cp升高

Cp为急性时相反应蛋白,在妊娠、感染、创伤、肿瘤和胆道阻塞性疾病时血清浓度增加。Cp显著升高会使血清呈现蓝绿色。